Fluorescence in situ hybridization(FISH)法を用いた胃がん悪性度評価と臨床応用に関する基礎的検討

Clinico-pathological Study of Fluorescence in Situ Hybridization on Assessment of Malignant Potential and its Clinical Application in Gastric Cancer

入江 秀明

FISH法によるヒト胃がんの悪性度評価およびその臨床への応用を目的として,胃生検標本59例の第1,7,11,17番染色体数的異常,およびDual-color FISH法によるsm胃がん切除例20例の第17番染色体とp53遺伝子の数的異常を同時に解析し,以下の結果を得た。

1.胃生検標本に対してFISH法が可能であり,第1,7,11,17番染色体解析では,胃がんの近傍正常組織には,monosomyおよびpolysomyを示す細胞の割合の増加は認めず,染色体の数的変化は認めなかった。

2.第1,7,11番染色体におけるmonosomy,および第1,7,11,17番染色体におけるpolysomyを示す細胞の割合は,正常組織とがん組織の間では有意な差を認め(p<0.0005～p<0.05),がんの進行に応じて増加する傾向にあり,これらの染色体の数的異常が,がんの発生進展に関与している可能性が示唆された。

3.手術例31症例と臨床病理学因子との比較検討では,リンパ節転移およびリンパ管浸潤は第7番,11番,17番染色体のpolyploid症例に有意に多く認められ(p<0.005～p<0.05),腹膜転移は第1番および11番染色体のaneupbid症例(各々p<0.01,p<0.05),静脈浸潤は第17番染色体のpolyploid症例に多く認められた(p<0.01)。このことから特定染色体の数的異常が胃がんの浸潤進展に関与している可能性が示唆された。

4.核1個につき第17番染色体数に対し,画3の遺伝子数が少ない場合を欠失(deletion)と定義した場合,欠失を示す細胞の割合は,sm胃がんでコントロールに比較し有意な増加を認め(p<0.0005),さらにリンパ節転移陽性例が陰性例に比較し有意な増加を認めた(p<0.005)。したがって,胃がん細胞のリンパ節転移にはp53欠失細胞の存在が深く関与している可能性が示唆された。

以上の結果から,胃生検組織を対象とした第17番染色体,p53遺伝子および他の遺伝子に対するFISH法解析をすることによる,1)前がん病変の悪性度評価,2)術前でm,sm胃がんと診断された症例における悪性度判定,特にリンパ節転移の有無の術前判定への臨床応用の可能性が示された。

The efficacy of fluorescence in situ hybridization (FISH) on alteration of chromosome and p53 gene was evaluated as an potential malignant marker and its clinical application in 59 gastric cancer specimens. The results are the followings:

1) Numerical chromosomal aberrations in gastric biopsy specimens could be detected with FISH. There was no significant difference concerning the fraction of monosomy and polysomy between normal and adjacent normal tissues in gastric tumor specimens.

2) There was a significant difference concerning the fraction of monosomy in chromosome 1, 7, 11 and polysomy (more than 3 copies per cell) in chromosome 1, 7, 11, 17 between normal and tumor tissues. These fractions were significantly increased in tumors with advanced stages according to the TNM classification. These results indicate that the chromosomal numerical aberrations may involve in tumorgenesis and its development.

3) Regarding 31 surgical specimens, the significant high incidences of lymphonode metastasis and lymphoductal invasion were observed in polyploid tumors in chromosome 7, 11 and 17. The significant high incidence of venous invasion was observed in polyploid tuomrs in chromosome 17. The significant high incidence of peritoneal dissemination was observed in aneuploid tumors in chromosome 1 and 11. These results suggest that the specific numerical aberrations of chromosomes may involve in invasion and development of gastric tumors.

4) Using dual-color fluorescence in situ hybridization in 20 early gastric cancers, a significant increase of the fraction of p53 decreased cells was observed in gastric cancer with sm invasion than that of normal tissues. More importantly, a significant incresae of the fraction of p53 deletion was observed in lymphonode positive gastric cancers with sm invasion. This finding suggest that lymphonode metastasis maybe associated with the deletion of p53 gene in early gastric cancer.

5) Based on these results, dual-color FISH analysis with gastric biopsy specimens seems effective method which could predict malignant potential of premalignant lesion, and that of gastric cancers with m and sm invasion before operation, especially concerning lymphonode metastasis.

FISH

Dual-color FISH

Fluorescence in situ hybridization

Gastric cancer

Biopsy

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広大医誌, 44(1), 1-13, 平8・2月 (1996) ～を参照している

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