胃・十二指腸疾患から分離したHelicobacter pyloriの遺伝子型による好中球機能に対する影響 <原著>

最近, Helicobacter pylori(以下H.pylori)が各種胃・十二指腸疾患の病因のひとつに挙げられている。H.pyloriの細胞障害性には, H.pyloriの産生する空胞化サイトトキシン(VacA)ならびにサイトトキシン関連蛋白(CagA)の好中球機能に対する影響が重要であると言われている。本研究は, H.pyloriの胃・十二指腸疾患における胃粘膜障害の機序を解明するため, 胃・十二指腸疾患患者よりH.pyloriを分離後, 培養し, その培養上清の好中球生存率および遊走能に対する効果を, vacAならびにcagA遺伝子の存在との関連下に検討した。培養株はvacA^+ cagA^+型株またはvacA^+ cagA^-型株の二通りのみであった。cagAの存在するH.pylori培養上清はcagAの存在しないものより強く好中球の遊走能を活性化した。一方, vacA^+ cagA^+型株またはvacA^+ cagA^-型株の培養上清は, 好中球生存率に影響を与えなかった。以上の結果は, vacA^+ cagA^+型, vacA^+ cagA^-型いずれのH.pylori株も好中球の生存率へは影響を与えないが, どちらも好中球遊走活性化能を持つこと, さらにはvacA^+ cagA^-型株よりもvacA^+ cagA^+型株の方が強い活性化能を持つことを示している。本研究の成果は従来のH.pyloriの胃粘膜障害で報告されている, 直接的障害説および好中球を経由しての間接的障害説を実証する上での一助となる。

Helicobacter pylori (H. pylori) produces cytokines and other unknow substances which are implicated to the cause of gastric mucosal injury. In the present study, we examined the effects of culture supernatants of H. pylori (two strains ; vacA^+ cagA^+ and vacA^+ cagA^-) on the migration and the viability of polymorphonuclear leukocytes. H. pyroli was isolated from gastric specimens of patients with chronic gastritis and gastric ulcer using H. pylori-selection plate and co-culture system with Brocell broth. The specimens were sedimented, streaked on the H. pylori-selection plate, and incubated for 5-7 days under a microaerophilic condition. The isolated strains were transferred to liquid culture and incubated for another 6 days with Brucell broth. The resultant culture was concentrated with ultrafiltration. The genotypes of vacA and cagA were determined by PCR. The effects of the culture supematant of H. pylori on the chemotaxis and cell viability of PMNs from healthy man were assayed by Boyden chamber method and supravital trypan blue staining, respectively. The culture supernatant from both strains stimulated the PMNs-migration. The number of PMNs in the Boyden chamber was 136±4 cells/high power field in vacA^+ caga^+ strain and 119±3 cells/high power field in vacA^+ cagA^- strain (p<0.05,p<0.01), indicating that leukocyte migration was significantly stronger in vacA^+ cagA^- strain. The survival rate of PMNs after adding the supernatant in the culture was 85±3 0n vacA^+ cagA^- and 87±5 0n vacA^+ cagA^- strain (not significant). These results indicate that H. pylori produces the chemotactic factor for PMNs, and the chemotactic effect was stronger in vacA^+ cagA^+ than in vacA^+ cagA^-. However, both strains of H. pylori did not produce lethaly-cytotoxic substance on the PMNs.